Hücre Kültürü Yapmanın 3 Yolu - Bi̇lgi̇ler

Hücre Kültürü Nasıl Yapılır - Bi̇lgi̇ler

İçerik

Adımlar
Topluluk Soruları ve Cevapları
İpuçları
İhtiyaç Duyacağınız Şeyler

Diğer Bölümler

Hücre kültürü, çok sayıda özel eğitim ve ekipman gerektirdiğinden yalnızca profesyonel laboratuvar çalışanlarının gerçekleştirebileceği karmaşık bir prosedürdür. Süreç, bir hayvan dokusundan küçük bir hücre örneği almayı ve hücreleri çoğalmaya teşvik etmeyi içerir. Aseptik prosedürlerin kullanılması, ideal kültür ve ortamın seçilmesi ve hücrelerin dostane bir ortamda tutulması, iyi proliferasyonun sağlanmasına yardımcı olur. Profesyoneller, çalışma alanlarını oluşturarak başlarlar, ardından deney için en iyi hücre kültürü materyallerini seçerler. Bundan sonra, yeni kültürlenmiş hücreleri izlemek ve sürece devam etmek için gerektiği şekilde alt kültürlemek önemlidir.

Adımlar

Yöntem 1/3: Çalışma Alanınızı Hazırlama

Aseptik bir çalışma alanı kurun ve ekipmanınızı sterilize edin. % 70 alkol dezenfektan sprey ile çalışma yüzeyinize ve hücre kültürü başlığınızın iç kısmına püskürtün. Hipokloritler, fenolikler ve alkoller de bir laboratuvardaki ekipmanı sterilize etmek için yaygın olarak kullanılır, ancak laboratuvarınızda nelerin mevcut olduğunu kontrol edin.
- Dağınıklığı azaltmak için çalışma alanınızdaki herhangi bir yabancı öğeyi kaldırın. Öğeleri, hücre kültürlerini gerçekleştirdiğiniz alanda saklamayın.
- Hücre kültürü başlık fanını açık bıraktığınızdan emin olun. Davlumbaz uzun bir süre kullanılmayacaksa kapatmayın.
- Çalışma alanınızı sterilize etmek için ne kullanmanız gerektiği konusunda sorularınız varsa bir laboratuvar süpervizörüne danışın.
Ellerinizi yıkayın ve kişisel koruyucu ekipman giyin. Ellerinizi yıkamak için antibakteriyel sabun ve ılık su kullanın. Sonra deneyiniz için eldiven, önlük, gözlük, maske ve diğer gerekli kişisel koruyucu ekipmanı giyin.
- Uzunsa saçınızı geri bağladığınızdan emin olun ki yoldan çıksın.
Kullanacağınız tüm reaktifleri, solüsyonları veya diğer medyayı sterilize edin. Bu, bir otoklav veya steril filtre kullanmayı içerebilir. Sterilize etmeye çalışmadan önce kullandığınız medya türü için yönergeleri kontrol edin.
- Kontaminasyonu önlemek için besiyerini sterilize ettikten hemen sonra şişeyi kapatın.
Kontaminasyonu önlemek için steril kullanım prosedürlerini izleyin. Hücre ortamınızı kimyasal veya biyolojik ajanlarla kirletmek deneyi bozabilir. Kimyasal kontaminantlar arasında hücre kültürü ortamındaki deterjanlar, su, endotoksinler ve kontaminantlar bulunur. Biyolojik kirleticiler arasında küfler, mayalar, bakteriler, virüsler ve mikoplazma yer alır. Bu kontaminantları hücre kültürü ortamınızdan uzak tutmak için her zaman aseptik tekniği uygulayın.
- Örneğin, ortamın içine dökülmesi kontaminasyon riskini artıracağından, ortamı şişenize aktarmak için bir pipet kullanmak en iyisidir.
İpucu: Steril bir çalışma alanı sağladığınızdan emin olmak için her zaman yavaş ve bilinçli olarak çalışın.

Yöntem 2/3: Hücre, Kültür ve Ortam Seçimi

Deneyleriniz için uygun hücre çizgisini seçin. Ticari veya kar amacı gütmeyen tedarikçilerden çok çeşitli hayvan hücre dizileri edinebilirsiniz. Hangi hücre türlerinin mevcut olduğunu kontrol edin ve denemeniz için en uygun olanı seçin. Başarılı bir deneme şansını artırmak için yüksek kaliteli bir hücre hattı seçtiğinizden emin olun. Göz önünde bulundurmak isteyebileceğiniz bazı kriterler şunları içerir:
- Hücrenin türleri
- Hücrelerin fonksiyonel özellikleri
- Sonlu veya sürekli hücre hatlarına ihtiyacınız olup olmadığı
- İdeal büyüme koşulları ve özellikleri
- Normal veya dönüştürülmüş hücrelere ihtiyacınız olup olmadığı
Uyarı: Laboratuvarda çalışan birinden alınan hücreleri asla kültürlemeye çalışmayın. Bu hücrelerin yanlışlıkla kişinin vücuduna girmesi kötü huylu bir hastalığa neden olabilir.
Çoğu hücre türü için uygun bir kültür kullanın. Yapışık kültür, hücrelerin katmanlandığı yapay bir substrattır. Bu tür bir kültür, hayvan hücrelerinin çoğunda en iyi sonucu verir, çünkü proliferasyon için dayanmak üzere bir substrat gerektirirler. Ancak, bu tür bir kültüre ihtiyacınız olup olmadığını belirlemek için kullandığınız hücre çizgisinin teknik özelliklerini kontrol etmeniz en iyisidir.
- Besiyerinizi yapışkan bir kültürdeki hücrelere ekledikten sonra, substrattan salınıp salınmadıklarını görmek için hücrelere mikroskop altında bakın. Alt tabakadan salınırlarsa yayılırlar.
Kendisine uyarlanmış hücreler için bir süspansiyon kültürü seçin. Süspansiyon ile hücreler hiçbir şeye dayanmaz. Bunun yerine, sıvı içinde serbestçe yüzerler, bu da eklenmiş ortam ile kültürün ölçeğini büyütmeyi kolaylaştırabilir. Bazı hücre hatları, bir süspansiyonda kullanılmak üzere özel olarak değiştirilmiştir, bu nedenle emin olmak için hücre hattı üreticisine danışın. Bir süspansiyon ortamı, yapışkan olmayan hücreler için de iyi bir seçenektir.
- Bir süspansiyon hücre kültürü kullanıyorsanız günlük hücre sayımı yapmanız gerekeceğini unutmayın.
Hücrelerinize en uygun kültür ortamını seçin. İdeal kültür ortamı, kullandığınız hücre türüne bağlı olarak değişecektir. Kullandığınız hücreler için ideal hücre kültürü ortamını belirlemek için hücre hattı üreticisine danışın. Bazı yaygın türler şunları içerir:
- Serum
- Bazal medya
- Azaltılmış serum ortamı
- Serumsuz ortam

Yöntem 3/3: Hücreleri İzleme

Hücre ortamının pH ve CO2 seviyelerini kontrol edin. Orta CO2 seviyeleri en iyi tüm hücre hatları için% 4-10 arasında tutulur. Bununla birlikte, ortamın ideal pH seviyesi, kullandığınız hücrelerin türüne göre değişecektir, bu nedenle her zaman hücre kültürünüzün pH seviyesini kontrol edin. İdeal pH seviyesi hakkında ayrıntılar almak için hücre hattı üreticisine danışın veya kullandığınız hücre türleri için ortak önerilen pH seviyelerini kullanın.
- Örneğin, memeli hücreleri en iyi 7,4 pH ile büyür, ancak böcek hücreleri en iyi 6,2 pH ile büyür.
Optimum ortamı elde etmek için sıcaklığı düzenleyin. Bazı hücreler yalnızca dar bir sıcaklık aralığında gelişirken, diğer hücreler daha geniş bir sıcaklık aralığında gelişebilir. Kullandığınız hücre tipini düşünün ve hücreleri ideal seviyede tuttuğunuz ortam sıcaklığını ayarlayın. Bazı yaygın sıcaklık önerileri şunları içerir:
- İnsan ve memeli hücreleri - 36 ila 37 ° C (97 ila 99 ° F)
- Böcek hücreleri - 27 ° C (81 ° F)
- Kuş hücreleri - 38,5 ° C (101,3 ° F)
- Soğuk kanlı hücreler - 15 ila 26 ° C (59 ila 79 ° F)
Bir kültüre başladıktan hemen sonra bir hemositometre kullanarak hücreleri sayın. Hemositometre, mikroskop altında hücrelerin üstünden geçen ızgara benzeri bir mercektir. Bu, hücreleri kadranlara ve diğer küçük parçalara bölerek hücreleri daha kolay saymanıza olanak tanır.
- Her bir ızgaradaki hücre sayısını hemositometre üzerine kaydettiğinizden emin olun, böylece hücrelerin bir sonraki sayımınızda çoğalıp çoğalmadığını belirleyebilirsiniz.
İpucu: Kültürdeki hücre sayısını takip etmeyi kolaylaştırmak için bir tıklayıcı kullanın.
İkiye katlandıktan sonra hücreleri alt kültürleyin. Ortamdaki hücrelerin sayısı ikiye katlandıktan sonra, hücreleri 2 kaba bölerek ve her birine taze ortam ekleyerek büyümelerine devam etmek için alt kültür yapabilirsiniz. İlk hücre kültürü için kullandığınız aynı tür substrat veya süspansiyon ortamını kullanın.
- Hücreleri her birinin yarısı olacak şekilde 2 şişeye bölün, ardından kaba 3 parça yeni ortam ekleyin, böylece ortam% 25 eski ve% 75 yeni olur.